淺析國產(chǎn)酶標(biāo)儀分析原理

　　國產(chǎn)酶標(biāo)儀酶免疫分析是基于酶催化反應(yīng)的特性來進(jìn)行檢測(cè)和定量分析免疫反應(yīng)。在實(shí)踐上，首先要讓酶標(biāo)記的抗體或抗原與相應(yīng)的配體（抗原或抗體）發(fā)生反應(yīng)，然后再加入酶底物。酶催化反應(yīng)發(fā)生后，可通過檢測(cè)下降的酶底物濃度或升高的酶催化產(chǎn)物濃度來達(dá)到檢測(cè)或定量分析抗原抗體反應(yīng)的目的。

　　一、酶免疫分析的基本原理酶是一種能催化化學(xué)反應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)，其催化效力超過目前所有的人造催化劑，一般可使反應(yīng)加速108一1010倍。此外，酶還具有高度的專一性，即每一種酶只催化一種或一組密切相關(guān)的化學(xué)反應(yīng)。EIA是將酶催化的放大作用與抗原、抗體的免疫反應(yīng)相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗體或抗原后，既不影響抗體或抗原的免疫反應(yīng)特異性，也不改變酶本身的催化活性，即在相應(yīng)的反應(yīng)底物參與下，標(biāo)記的酶可以使底物基質(zhì)水解而呈色，或使供氫體由無色的還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩难趸?，這種有色產(chǎn)物可以通過肉眼、光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡進(jìn)行觀察，也可以用分光光度計(jì)加以測(cè)定。呈色反應(yīng)顯示了反應(yīng)體系中酶，即被標(biāo)記的抗體（或抗原）的存在，從而證明發(fā)生了相應(yīng)的免疫學(xué)反應(yīng)。因此，EIA是一種特異而敏感的檢測(cè)技術(shù)，可以在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，也可以在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行半定量、定量測(cè)定。

　　二、酶免疫分析方法中的主要組成部分

　?。ㄒ唬┕滔噍d體非均相EIA免疫實(shí)驗(yàn)所用的固相載體應(yīng)具備以下條件：①可結(jié)合抗體（抗原）的容量大、種類多；②可將抗體（抗原）牢固地固定在其表面，雖經(jīng)長(zhǎng)期保存和多次洗滌也不脫落；③不影響所固定抗體（抗原）的免疫反應(yīng)性；④抗體的Fc段（或抗原）被固定在載體上時(shí)其與抗原（抗體）的結(jié)合空間位點(diǎn)應(yīng)朝向反應(yīng)液。常用的材料有：1．塑料如由聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的微孔反應(yīng)板（48孔、96孔）或小珠、小試管等產(chǎn)品，是目前應(yīng)用zui廣、zui普及的一種固相載體，主要通過非共價(jià)鍵吸附抗原或抗體。該類載體的應(yīng)用可以簡(jiǎn)化整個(gè)EIA的操作步驟，使之易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。2、可磁化顆粒或瓊脂糖珠這類固相載體通過共價(jià)鍵結(jié)合抗原或抗體，在檢測(cè)中可分散到整個(gè)反應(yīng)混合液中，有很大的表面積，結(jié)合容量較大，因此結(jié)合較為有效，使免疫反應(yīng)得以迅速進(jìn)行；但制備固相抗體有較嚴(yán)格的技術(shù)要求。

　?。ǘ┌坏鞍捉?jīng)過純化后，大部分抗原、抗體都可作為ELA反應(yīng)的包被蛋白。抗原或抗體的濃度高，吸附在載體表面的也越多。

　　（三）待測(cè)樣品EIA中的待測(cè)樣品可以為細(xì)胞、血清、腦脊液、胸腹水及其他體液中的任何抗原、抗體，某些反應(yīng)，如間接法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、競(jìng)爭(zhēng)抑制法檢測(cè)乙型病毒性肝炎核心區(qū)外型抗體（抗-HBcIgG）等需要對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行分析.

　?。ㄋ模┟笜?biāo)記物酶標(biāo)記物是指將酶通過某些化學(xué)物（交聯(lián)劑）和抗原、抗體、Fab片段等蛋白結(jié)合在一起的復(fù)合物，利用該復(fù)合物可以檢測(cè)相對(duì)應(yīng)的免疫反應(yīng)原性蛋白。目前常用的交聯(lián)劑有：戊二醛、氟二硝基苯、過碘酸鈉等。

　?。ㄎ澹└鞣N緩沖液如：包被液、封閉液、稀釋液、洗液、顯色底物和緩沖液、終止液等。