技術(shù)文章

Technical articles

當(dāng)前位置：首頁技術(shù)文章分析酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)不可同一而論的原因

分析酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)不可同一而論的原因

更新時(shí)間：2017-07-28點(diǎn)擊次數(shù)：1661
酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)都是實(shí)驗(yàn)室常用的兩種儀器，它們的測(cè)定原理是相同的，都是使用朗伯-比耳定律，測(cè)定的都是樣本的吸光度。
酶標(biāo)儀按照功能的不同劃分,可以分為（1）光吸收酶標(biāo)儀（可見酶標(biāo)儀，紫外/可見酶標(biāo)儀）（2）熒光酶標(biāo)儀（3）化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀。
分光光度計(jì)按照波長(zhǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為：（1）可見光分光光度計(jì)（2）紫外分光光度計(jì)（3）紅外分光光度計(jì)（4）熒光分光光度計(jì)（5）原子吸收分光光度計(jì)。
酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)存在一些不同之處，具體差別體現(xiàn)在以下三個(gè)方面：
（1）盛裝待測(cè)溶液的容器：
分光光度計(jì)用的是比色皿，酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用，每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成，對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，因此用它作為固相載體，酶標(biāo)板通常為48孔或96孔，每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。
（2）光路的方向：
分光光度計(jì)是水平光路，而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測(cè)樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
（3）光路的長(zhǎng)度：
由于光密度（OD值）與吸光系數(shù), 待測(cè)組分的濃度以及光路長(zhǎng)度成正比關(guān)系。
分光光度計(jì)采用的比色杯的寬度通常是1cm，所以光路長(zhǎng)度固定為1cm。因此不同儀器，不同批次測(cè)量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。
而酶標(biāo)儀采用的是垂直光路, 所以光路的長(zhǎng)度應(yīng)該是液體液面的高度。所以測(cè)得的值受到樣品的體積的影響。